我波利诺娃(D.R.) Zagirova,L.Y. 科卡耶娃布斯科(I.V.) Levantsevich,S.N. 伊兰斯基
近年来,白俄罗斯的马铃薯和种子种群的植物检疫状况明显恶化。 某些类型的有害生物的作用及其在农杆菌素中的比例已经改变。 许多疾病不仅增加了疾病的危害(晚疫病,交链孢菌,各种sc疮,细菌病,枯萎镰刀菌腐烂),而且还研究了新的,未经充分研究的疾病,例如伤口水腐烂(图1)。 这种疾病发生在印度,中亚和其他南部国家,在白俄罗斯的戈梅利,布列斯特,格罗德诺和明斯克地区也有发现。 像其他居住在土壤中的卵菌一样,在长时间的降雨过程中,在水分过多的情况下,终极腐植酸也会造成严重破坏(在排水不佳的地区)(Taylor等,2008)。
在白俄罗斯,随着生长季节温度的升高,这种疾病的蔓延在数年内得到了体现:在某些批次的马铃薯中,有8-10%的块茎受到了影响。 块茎的伤口含水腐烂会造成重大破坏,这是由于缺乏抗性品种,发达的保护措施以及在块茎受到破坏的情况下疾病的快速发展造成的(Zhuromskaya,2003; Ivanyuk等,2005)。 该病仅影响块茎。 在俄罗斯,伤口的腐烂还不明显。
在这项工作中,我们调查了白俄罗斯国家马铃薯和园艺科学院科学与实践中心(明斯克州)从受害的马铃薯品种Vektar Belorussian,Skarb和育种杂种中分离得到的4种导致伤口腐烂的病原菌。 该研究的目的是确定分离菌株的种类,与马铃薯块茎有关的毒力,评估在不同环境温度下的生长以及对甲霜灵的抗性。
将分离物的菌丝体在液态豌豆培养基上生长(将180 g冷冻的豌豆在10升蒸馏水中煮沸1分钟,然后在30个大气压下高压灭菌1分钟); 从每个菌株中分离DNA。 对于DNA分离,将冷冻的菌丝体在液氮中研磨,在CTAB缓冲液中裂解,然后用氯仿脱蛋白。 DNA储存在–20°C的去离子水中。 对使用引物ITS18和ITS5,8扩增的物种特异性基因组区域(核糖体基因1S和1S区域以及内部转录的基因间隔子ITS2的区域)的核苷酸序列进行分析(White,1990),表明所研究的菌株属于终极腐霉菌。 (同义词Globisporangium ultimum(Trow)Uzuhashi,Tojo和Kakish)。
所有研究的菌株均影响置于潮湿箱中的Gala马铃薯块茎的切片。 在它们上形成黑斑,随后变成湿润的深层穿透性溃疡(图2)。 通过将终极体育菌丝体置于块茎切片的中心进行感染。
接种的块茎圆盘在+ 22°C下孵育。 在最初的2天中注意到受影响区域的最大增长率,然后溃疡的面积几乎保持不变。
该模式对所有研究菌株均有效。
在5、15、24和34°C的温度下,在燕麦琼脂培养基上估计菌株的生长速率(图3)。 在所有温度下均观察到生长。 在24°C下观察到最大生长速率(86毫米杯在2天内完全长满了)。 在15和34°C时,生长速度明显降低(杯子分别在4和3天内长满)。
在15、24和34°C的温度下,所有研究菌株的生长速率没有差异。 在5°C的温度下,菌株P1的生长速度快于其他菌株(第20天为4毫米),P4的生长速度稍慢(第10天为4毫米),P2和P3实际上没有生长。
还应注意的是,在菜盘上种植后,在24°C的温度下立即开始生长,在15和34°C的温度下,开始活跃生长的时间推迟了1天,而在5°C的情况下则推迟了2天。
甲霜灵(及其异构体甲霜灵)被认为是控制土壤卵菌的最有效药物。 甲霜灵能够穿透块茎并提供(即使浓度很低)其长期保护作用(Taylor等,2008; Bruin等,1982)。 但是,在人群中出现耐药菌株后,甲霜灵的有效性急剧下降。 在美国的几个地区都发现了高抗性菌株(Taylor等,2002)。 没有关于白俄罗斯白僵菌菌株对甲霜灵的抗药性的数据,因此决定在这项工作中测试其对药物的抗药性。
在燕麦琼脂培养基上加入不同浓度的杀菌剂后,对杀菌剂甲霜灵的敏感性进行了研究(Pobedinskaya,Elansky,2014)。
所研究的菌株对甲霜灵的抗性有所不同(表1)。 因此,在杀真菌剂浓度为1 mg / l时,P4菌株的生长完全停止,其余菌株大大减慢了速度。 菌株P1和P2在甲霜灵浓度为10 mg / L的培养基上生长非常缓慢。 所有菌株的计算出的有效浓度EC50(相对于对照而言,使菌株的生长速度减慢2倍的杀菌剂浓度)小于1 mg / L。 因此,所有研究的菌株对甲霜灵均敏感。 已经显示出它在抑制终极疟原虫的生长方面非常有效。
据布鲁因等。 (1982)在植株生长期间用甲霜灵以0,5 kg / ha的剂量处理后,块茎中杀菌剂的积累为0,055μg/ g,皮层中为0,022μg/ g,块茎中部为0,034μg/ g。 根据我们的数据,甲霜灵的浓度不足以抵消这种疾病,但会减慢其发展速度。
当在燕麦培养基上生长时,所有菌株均在单培养中形成卵孢子(图4),这是终极体育杆菌的典型特征。 菌株的成对剪接没有发现任何营养不相容的症状-杯子均匀地覆盖有菌丝体。
获得的数据表明,P。ultimum是一种植物病原体,能够在较宽的温度范围内快速生长,包括在5°C的储存温度下。 它对马铃薯块茎的组织有毒,并形成能长期存活的卵孢子。 因此,该物种是一种危险的植物病原体,可能对农业构成威胁,需要进一步研究。
该研究是在俄罗斯科学基金会(项目N 14-50-00029)的支持下进行的。
表1.终极体育菌株对甲霜灵的敏感性
应变 | 甲霜灵浓度,mg / l | ||
0(控制) | 1 | 10 | |
P1 | 63 | 6 | 0 |
P2 | 65 | 5 | 0 |
P3 | 59 | 0 | 0 |
P4 | 61 | 0 | 0 |
P1 | 105 | 10 | 3 |
P2 | 110 | 10 | 3 |
P3 | 95 | 0 | 0 |
P4 | 98 | 0 | 0 |
大约给出了3次测量的平均数据。
该文章发表在《马铃薯保护》杂志上(1年第2017期)